Специфика измерения кортизола

17 октября 2022 г.

Специфика измерения кортизола

Измерение кортизола - анализ для первичной диагностики функции гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси (о-ГГН). Среди практиков существует мнение, что уровень достоверности анализа на кортизол крови наименьший, тогда как кортизол в суточной моче является наиболее точным анализом.

Попробуем разобраться, использовав материалы сервера Uptodate и данные некоторых российских лабораторий.

В первую очередь, важно учитывать множество факторов, которые могут влиять на концентрацию кортизола в крови, в частности, спорадическое выделение кортизола и суточные колебания его уровня, что делает интерпретацию однократного анализа бессмысленной.

ИЗМЕРЕНИЕ КОРТИЗОЛА В СЫВОРОТКЕ

Кортизол в сыворотке крови измеряется несколькими методами. Не все из них используются частными лабораториями в РФ. Типы анализов, имеющие лишь историческое или научное значение не перечислены ниже.

А. В радиоиммуноанализе используются выращенные к аналогу кортизола поликлональные или моноклональные антитела. Каждое антитело характеризуется степенью сродства и перекрестной чувствительностью к другим эндогенными или экзогенными стероидами, содержащимися в сыворотке. Для проведения анализа используются антитела, кортизол-маркер с изотопом и поверочный стандарт кортизола. Результаты зависят от специфичности антитела, используемого в анализе. Как жидкофазный, так и твердофазный анализы с необходимой чувствительностью и специфичностью существуют даже в виде готовых наборов. Таким образом измеряется ОБЩИЙ КОРТИЗОЛ в сыворотке крови.

Б. Вариации радиоиммуноанализа с использованием флуоресцентных, хемилюминесцентных и других меток вместо радиоизотопных меток, а также двухсайтовые антитела (одно антитело связано с твердым субстратом, другое несет радиоактивную или другую метку, а стероид образует мост между ними) имеют схожую чувствительность и специфичность и доступны для использования в автоматических анализаторах. Результаты, как и при радиоиммуноанализе, зависят от специфичности антитела, используемого в анализе.

Helix| Ситилаб

В. Структурный анализ на СВОБОДНЫЙ КОРТИЗОЛ (несвязанный, неконъюгированный). Свободный кортизол - форма гормона, имеющая непосредственную физиологическую активность. В отличие от анализа на основе антител, структурный анализ (ВЭЖХ, масс-спектрометрия) высокоспецифичен для молекулы кортизола; он также может изолированно измерять синтетические стероиды. Этот метод отделяет кортизол от других стероидов, стероидных метаболитов и связанного с КСГ кортизола.

Ситилаб

НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ КОРТИЗОЛА СЫВОРОТКИ

Концентрация кортизола в сыворотке крови обычно отражает концентрацию АКТГ и поэтому имеет циркадную ритмичность, а так же зависимость от стресса.

Нормальные значения зависят от конкретного анализа. Приведенные ниже значения являются репрезентативными для усредненного радиоиммуноанализа; значения, полученные конкурентным анализом связывания белков, будут аналогичными, а результаты флуорометрического анализа примерно на 3 мкг/дл (85 нмоль/л) выше!

Концентрация кортизола в норме

Раннее утро (около 6:00): от 10 до 20 мкг/дл (275-555 нмоль/л). В 16 часов: от 3 до 10 мкг/дл (85 - 275 нмоль/л). Через час после наступления сна (при обычном времени засыпания) должна быть самая низкая концентрация: менее 5 мкг/дл (140 нмоль/л).

У человека может быть частичная гипофизарная или надпочечниковая недостаточность, но концентрация АКТГ в плазме и кортизола в сыворотке крови остаются в пределах нормы. По этим причинам следует проводить стимулирующее или супрессивное тестирование при наличии сомнений. Тем не менее, образцы, взятые в соответствующее время при подозрении на эндокринную дисфункцию, могут быть очень полезны для исключения гипо- или гиперфункции надпочечников.

При интерпретации результатов исследования кортизола в сыворотке необходимо учитывать еще несколько факторов:

1. Концентрация кортизола в сыворотке крови плохо коррелирует со скоростью выработки кортизола, если не учитывать концентрацию кортикостероид-связывающего глобулина, КСГ (серпин А6, транскортин). Около 90% кортизола крови связано (конъюгировано) транскортином (связанная форма = неактивная форма). Синтез КСГ в печени увеличивается под действием эстрогенов, в силу чего концентрация общего кортизола в сыворотке крови рано утром может составлять 50 мкг/дл (1400 нмоль/л) или выше. Что является вариантом нормы во время беременности или после приема высоких доз оральных контрацептивов (≥ 50 мкг этинилэстрадиола).
2. Концентрация КСГ в сыворотке крови обратно коррелирует с показателями секреции инсулина, такими как концентрация глюкозы в сыворотке натощак и уровень гликироюванного гемоглобина. Концентрация КСГ в сыворотке крови повышена у пациентов с ожирением и нарушенной толерантностью к глюкозе. Некоторые люди имеют низкий уровень КСГ на генетической основе. Уровень КСГ снижается при гиперинсулинемии, гипертиреозе, гепатаргическом и нефротическом синдроме.
3. Масса тела не оказывает заметного влияния на концентрацию кортизола в сыворотке крови, но тяжелое недоедание, по-видимому, оказывает большее ингибирующее влияние на метаболизм кортизола, чем на его выработку, тем самым незначительно повышая концентрацию кортизола в сыворотке.
4. Тяжелый депрессивный эпизод может приводить к динамике кортизола, сходной с таковой при болезни Кушинга. Однако у большинства амбулаторных пациентов с большой депрессией концентрация кортизола в сыворотке крови в течение часа после сна остается нормальной.
5. Синтетические глюкокортикоиды - экзогенные глюкокортикоиды могут изменять значения кортизола в сыворотке крови либо прямо, если они перекрестно реагируют с антителами, что приводит к ложным повышениям, либо косвенно, если они подавляют о-ГГН, что приводит к низким значениям.
6. Неглюкокортикоидные препараты. Некоторые препараты индуцируют печеночные ферменты цитохрома P-450, которые метаболизируют стероиды. Эти препараты не изменяют концентрацию кортизола в сыворотке крови у нормальных людей, но они могут мешать проведению тестов на подавление дексаметазоном.
7. Злоупотребление алкоголем, достаточное для повышения концентрации печеночных ферментов в сыворотке крови, особенно гамма-глутамилтрансферазы, может вызвать синдром псевдо-Кушинга и высокие концентрации кортизола в сыворотке крови.

ИЗМЕРЕНИЕ КОРТИЗОЛА В СЛЮНЕ

Свободный кортизол сыворотки свободно диффундирует в слюну. Поэтому измерения кортизола в слюне более точно отражают концентрацию свободного кортизола в сыворотке, чем измерения общего кортизола в сыворотке. Препарат для анализа - слюна (2,5 мл) может храниться при комнатной температуре в течение нескольких дней или замораживаться на длительный срок.

Выполняемый при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии и Масс-спектрометрии анализ на свободный кортизол сопоставим по достоверности с анализом на свободный кортизол в сыворотке крови тем же методом. Доступно в Ситилаб

Электрохемилюминесцентный иммуноанализ (ECLIA), уступающий по качеству ВЭЖХ есть в Helix.

Helix так же предлагает комплексный анализ стероидных гормонов слюны на стадию стресса.

Нормальные значения

Концентрация кортизола в слюне меняется в течение суток, составляя около 5,6 нг/мл (15,4 нмоль/л) в 8-9 часов утра и около 1 нг/мл (2,8 нмоль/л) в 11 часов вечера.

Измерение кортизола в слюне особенно полезно для серийной оценки секреции кортизола у амбулаторных пациентов, которые могут собрать несколько образцов и хранить их в холодильнике в течение нескольких дней между посещениями клиники.

РЕЗЮМЕ

Методология анализа влияет на нормальный диапазон. Доступные в настоящее время методы диагностики на основе антител вступают в перекрестную реакцию с некортизоловыми стероидами и имеют более высокую верхнюю границу нормы, чем структурные методы анализа, такие как жидкостная хроматография высокого давления.

Уровень КСГ и альбумина, связывающих белков для кортизола, влияет на общий кортизол в сыворотке, но не на уровень свободного кортизола в сыворотке или слюне. КСГ и альбумин могут быть значительно снижены у тяжелобольных пациентов, поэтому показатели общего кортизола могут не отражать функцию надпочечников. И наоборот, вызванное эстрогеном повышение КСГ может маскировать низкую выработку кортизола.

У людей с нормальным циклом сон-бодрствование показатели кортизола самые низкие в период сна, а пик приходится на раннее утро. Это физиологическое различие используется в диагностических целях. Пациенты с синдромом Кушинга имеют повышенные показатели кортизола в слюне и сыворотке крови поздним вечером. У пациентов с тяжелой надпочечниковой недостаточностью может быть низкая концентрация кортизола в сыворотке крови рано утром. Если этот показатель превышает 10 мкг/дл (276 нмоль/л), маловероятно, что у пациента наблюдается клинически значимая надпочечниковая недостаточность, тогда как если он составляет менее 3 мкг/дл (83 нмоль/л), то вероятность надпочечниковой недостаточности высока.

Определение кортизола в суточной моче Helix| Ситилаб | "Наука"

В моче, как и в крови, кортизол представлен свободной и конъюгированной фракциями. Определение уровня кортизола в суточной моче - это определение суммарной концентрации связанного и свободного кортизола. Суточные колебания концентрации кортизола в крови нивелируются.

Измерение 24-часовой экскреции кортизола с мочой является тестом первой линии для диагностики гиперкортицизма и мониторингом эффективности ингибиторов стероидогенеза.

Свободный кортизол в моче (СКМ) измеряет только кортизол, не связанный с КСГ (который фильтруется почками в неизмененном виде). Поэтому на СКМ не влияют лекарства, которые влияют на КСГ, например, пероральный прием эстрогенов в дозе свыше 50 мкг не изменяет уровень СКМ.

СКМ измеряется с помощью иммуноферментного анализа или жидкостной хроматографии - тандемной масс-спектрометрии (ЖХ-МС/МС), причем последний метод является предпочтительным.

На сайтах российских лабораторий ЖХ-МС/МС, к сожалению, не упоминается. Ситилаб: иммунохемилюминисцентный анализ. Наука: не указано. Скайлаб: не указано. Гемотест: не указано. Helix: иммунохемилюминесцентный анализ.

Клиницистам следует обратить пристальное внимание на референсные диапазоны для СКМ, поскольку они значительно варьируют в зависимости от используемого метода анализа.

Результаты, полученные с помощью неспецифического иммуноанализа, следует интерпретировать с осторожностью, учитывая возможность того, что измеряются все глюкокортикоиды (эндогенные и экзогенные) и их метаболиты.

Mатериалы

https://pro.uptodatefree.ir/show/161

https://pro.uptodatefree.ir/show/170

https://pro.uptodatefree.ir/show/154

А так же сайты медицинских лабораторий, указанных в тексте.